Руководство ВОЗ

Пятое издание предоставляет обновленные, обоснованные, подробные протоколы для рутинного, дополнительного, исследовательского анализа, с целью повышения качества и стандартизации семиологического анализа и повышения сопоставимости результатов, полученных в разных лабораториях. Руководство ВОЗ состоит из трех частей: семиологический анализ (главы 2–4), методы обработки спермы (главы 5 и 6) и контроль качества (глава 7). Методы, описанные в руководстве ВОЗ, приводятся как рекомендации для улучшения качества проведения семиологического анализа и сравнения полученных результатов. Их не следует в обязательном порядке утверждать как стандарт для местных, национальных или мировых лабораторных учреждений. Проведение анализа эякулята может быть полезно как для клинических, так и исследовательских целей, для изучения фертильного статуса мужчин, а также для мониторинга сперматогенеза во время лечения.Это руководство предназначено для научных сотрудников, лаборантов и руководителей, использующих семиологический анализ в клинической и исследовательской практике лаборатории.

1000 i

ID: 1099 Артикул: 412 Категория:
Авторы:Курило Л.Ф.

СОДЕРЖАНИЕ:

ОГЛАВЛЕНИЕ
Благодарности

  • Список сокращений
  • 1 Предисловие
  • 1.1 Введение
  • 1.2 Пятое издание
  • 1.3 Обзор руководства
  • ЧАСТЬ 1 ИССЛЕДОВАНИЕ ЭЯКУЛЯТА ЧЕЛОВЕКА
  • Глава 2 Стандартные тесты
  • 2.1 Введение
  • 2.2 Сбор образцов
  • 2.2.1 Подготовка
  • 2.2.2 Сбор эякулята для диагностических или исследовательских целей
  • 2.2.3 Стерильный сбор эякулята для вспомогательных репродуктивных технологий
  • 2.2.4 Стерильный сбор эякулята для микробиологического анализа
  • 2.2.5 Сбор семени в домашних условиях
  • 2.2.6 Сбор эякулята с помощью презерватива
  • 2.2.7 Меры безопасности при работе с образцами
  • 2.3 Первоначальная макроскопическая оценка эякулята
  • 2.3.1 Разжижение
  • 2.3.2 Вязкость эякулята
  • 2.3.3 Внешний вид эякулята
  • 2.3.4 Объем эякулята
  • 2.3.5 pH эякулята
  • 2.4 Первоначальная микроскопическая оценка эякулята. Полное смешивание и представление образца спермы
  • 2.4.2 Приготовление влажного препарата
  • 2.4.3 Агрегация сперматозоидов
  • 2.4.4 Агглютинация сперматозоидов
  • 2.4.5 Клеточные элементы, отличные от сперматозоидов
  • 2.5 Подвижность сперматозоидов
  • 2.5.1 Категории подвижности сперматозоидов
  • 2.5.2 Подготовка и оценка образца спермы по подвижности
  • 2.5.3 Примеры с решениями
  • 2.5.4 Минимальное референсное значение
  • 2.6 Жизнеспособность сперматозоидов
  • 2.6.1 Тест на жизнеспособность с использованием окрашивания эозин-нигрозином
  • 2.6.2 Тест на жизнеспособность с использованием только эозина
  • 2.6.3 Тест на жизнеспособность с использованием гипоосмотического набухания
  • 2.7 Определение количества сперматозоидов
  • 2.7.2 Усовершенствованный гемоцитометр Нэйбауера
  • 2.7.3 Использование сетки гемоцитометра
  • 2.7.4 Уход за счетной камерой
  • 2.7.5 Фиксация разведенного образца спермы
  • 2.7.6 Важность подсчета достаточного количества сперматозоидов
  • 2.8 Рутинная процедура подсчета сперматозоидов
  • 2.8.1 Определение требуемого разведения
  • 2.8.2 Разведение и наполнение камеры гемоцитометра2.8.3 Оценка числа сперматозоидов в расчетных камерах
  • 2.8.4 Вычисление концентрации сперматозоидов в эякуляте
  • 2.8.5 Примеры с решениями
  • 2.8.6 Минимальное референсное значение для концентрации сперматозоидов
  • 2.8.7 Вычисление общего числа сперматозоидов в эякуляте
  • 2.8.8 Минимальное референсное значение общего числа сперматозоидов
  • 2.9 Низкое число сперматозоидов: криптозооспермия и предполагаемая азооспермия
  • 2.10 Случаи, когда не требуется точная оценка низкого числа сперматозоидов
  • 2.10.1 Не производить никаких дальнейших действий
  • 2.10.2 Оценка образцов спермы после центрифугирования для обнаружения сперматозоидов
  • 2.10.3 Оценка нецентрифугированных образцов для обнаружения подвижных сперматозоидов
  • 2.11 Случаи, когда требуется точная оценка низкой концентрации сперматозоидов
  • 2.11.1 Оценка низкого числа сперматозоидов во всей усовершенствованной камере Нэйбауера (фазово-контрастная микроскопия)
  • 2.11.2 Оценка низкого числа сперматозоидов на одноразовых предметных стеклах большого объема (флуоресцентная микроскопия)
  • 2.12 Подсчет клеток, отличных от сперматозоидов8
  • 2.12.1 Вычисление концентрации округлых клеток в сперме
  • 2.12.2 Чувствительность метода
  • 2.12.3 Примеры с решениями
  • 2.13 Морфология сперматозоидов
  • 2.13.1 Понятие морфологически нормального сперматозоида
  • 2.13.2 Приготовление мазков эякулята
  • 2.14 Методы окрашивания
  • 2.14.1 Традиционная фиксация и последующее окрашивание
  • 2.14.2 Процедура окрашивания по Папаниколау для оценки морфологии сперматозоидов
  • 2.14.3 Окрашивание по Шорру для оценки морфологии сперматозоидов 68
  • 2.14.4 Процедура быстрого окрашивания для оценки морфологии сперматозоидов
  • 2.15 Оценка окрашенных препаратов
  • 2.15.1 Классификация морфологически нормальных сперматозоидов
  • 2.15.2 Классификация морфологически аномальных сперматозоидов
  • 2.16 Морфология сперматозоидов на вклейках 1-14
  • 2.17 Анализ морфологии сперматозоидов на окрашенных мазках
  • 2.17.1 Оценка морфологии нормального сперматозоида
  • 2.17.2 Примеры с решениями
  • 2.17.3 Минимальное референсное значение
  • 2.17.4 Оценка морфологии аномального сперматозоида
  • 2.17.5 Примеры с решениями
  • 2.17.6 Оценка особых дефектов сперматозоидов
  • 2.18 Оценка лейкоцитов в сперме
  • 2.18.1 Окраска клеток, положительных на пероксидазу, с помощью орто-толуидина
  • 2.19 Оценка незрелых половых клеток в сперме
  • 2.20 Оценка антител, покрывающих сперматозоиды
  • 2.20.1 Тест на смешанную анти глобул и новую реакцию (MAR-тест)
  • 2.20.2 Прямой тест с иммунными шариками
  • 2.20.3 Непрямой тест с иммунными шариками
  • Глава 3 Дополнительные тесты
  • 3.1 Индексы множественных дефектов сперматозоидов
  • 3.1.1 Подсчет индексов множественных дефектов сперматозоидов
  • 3.1.2 Примеры с решениями
  • 3.2 Панлейкоцит (CD45). Иммуноцитохимическое окрашивание (CD45)
  • 3.2.1 Принцип
  • 3.2.2 Реагенты
  • 3.2.3 Процедура
  • 3.3 Оценка взаимодействия сперматозоидов и цервикальной слизи
  • 3.3.1 Тест in vivo (посткоитальный тест)
  • 3.3.2 Тесты in vitro
  • 3.3.3 Упрощенный in vitro тест на предметном стекле
  • 3.3.4 Тест с капиллярными трубочками
  • 3.4 Биохимический анализ функции придаточных половых желез
  • 3.4.1 Определение цинка в семенной жидкости
  • 3.4.2 Оценка фруктозы в семенной плазме
  • 3.4.3 Измерение нейтральной а-глюкозидазы в семенной плазме
  • 3.5 Компьютерный анализ эякулята
  • 3.5.1 Введение
  • 3.5.2 Использование CASA для оценки подвижности сперматозоидов
  • 3.5.3 Использование CASA для оценки концентрации сперматозоидов
  • 3.5.4 Компьютерная оценка морфологии сперматозоидов
  • Глава 4 Научные тесты
  • 4.1 Оценка свободных радикалов
  • 4.1.1 Введение
  • 4.1.2 Оценка свободных радикалов, продуцируемых в сперме
  • 4.2 Оценка взаимодействия сперматозоидов с ооцитом человека
  • 4.3 Оценка связывания сперматозоидов с зоной пеллюцида человека
  • 4.4 Оценка акросомной реакции
  • 4.4.1 Процедура флуоресцентной оценки акросомного статуса
  • 4.4.2 Оценка индуцированной акросомной реакции
  • 4.5 Тест с ооцитами хомячка, лишенными зоны пеллюцида
  • 4.5.1 Протокол
  • 4.6 Оценка хроматина сперматозоидов
  • ЧАСТЬ 2 ОБРАБОТКА ЭЯКУЛЯТА ЧЕЛОВЕКА
    Глава 5 Методы обработки эякулята
  • . 5.1 Введение
  • 5.1.1 Случаи, когда сперматозоиды необходимо выделить
  • из семенной жидкости
  • 5.1.2 Выбор метода обработки эякулята
  • 5.1.3 Эффективность отделения сперматозоидов от семенной жидкости
  • и инфекционных организмов
  • 5.2 Общие принципы
  • 5.3 Простое отмывание
  • 5.3.1 Реагенты
  • 5.3.2 Процедура
  • 5.4 Прямой метод swim-up
  • 5.4.1 Реагенты
  • 5.4.2 Процедура
  • 5.5 Градиент плотностей
  • 5.5.1 Реагенты
  • 5.5.2 Процедура
  • 5.6 Работа с ВИЧ-инфицированными образцами эякулята
  • 5.7 Обработка тестикулярных и эпидидимальных сперматозоидов
  • 5.7.1 Ферментный метод
  • 5.7.2 Механический метод
  • 5.7.3 Обработка суспензии сперматозоидов для интрацитоплазматической инъекции (ИКСИ)
  • 5.8 Обработка спермы при ретроградной эякуляции
  • 5.9 Обработка спермы, полученной путем вспомогательной эякуляции
  • Глава 6 Криоконсервация сперматозоидов
  • 6.1 Введение
  • 6.2 Протоколы криоконсервации спермы
  • 6.2.1 Стандартная процедура
  • 6.2.2 Модифицированный протокол замораживания для образцов с олигозооспермией и для хирургически полученных сперматозоидов
  • 6.2.3 Маркировка соломин и ведение записей
  • ЧАСТЬ 3 ОБЕСПЕЧЕНИЕ КАЧЕСТВА
    Глава 7 Обеспечение и контроль качества
  • 7.1 Контроль качества в гидрологической лаборатории
  • 7.2 Природа ошибок при анализе эякулята
  • 7.3 Минимизация статистической ошибки выборки
  • 7.4 Программа обеспечения качества
  • 7.5 Прописи стандартных лабораторных процедур
  • 7.6 Внутренний контроль качества
  • 7.6.1 Покупка образцов для контроля качества
  • 7.6.2 Образцы, приготовленные в лаборатории
  • 7.6.3 Хранящиеся образцы эякулята для контроля качества (приготовленные промышленно или в лаборатории)
  • 7.6.4 Нативные образцы эякулята для контроля качества (приготовленные в лаборатории)
  • 7.7 Статистические процедуры оценки систематических различий результатов, полученных одним и тем же лаборантом и разными лаборантами
  • 7.7.1 График Xbar
  • 7.7.2 График S
  • 7.8 Процедуры контроля качества для процентных значений
  • 7.9 Оценка графиков Xbar и S
  • 7.9.1 Как обнаружить значения, лежащие вне контрольных границ
  • 7.9.2 Причины появления значения вне контрольных границ
  • 7.9.3 Реакция на значения вне контрольных
  • 7.10 Статистические процедуры оценки вариабельности результатов, полученных одним и разными лаборантами
  • 7.10.1 Сравнение результатов от двух и более лаборантов
  • 7.10.2 Ежемесячный мониторинг средних значений
  • 7.11 Внешний контроль качества и процедуры обеспечения качества
  • 7.11.1 Оценка результатов внешнего контроля качества
  • 7.11.2 Отношение к результатам, выходящим за рамки контрольных значений
  • 7.12 Частота и приоритетность процедур контроля качества
  • 7.13 Обучение
  • 7.13.1 Практические советы при трудностях с оценкой концентрации сперматозоидов
  • 7.13.2 Практические советы при трудностях оценки морфологии сперматозоидов
  • 7.13.3 Практические советы при трудностях оценки подвижности сперматозоидов
  • 7.13.4 Практические советы при трудностях оценки жизнеспособности сперматозоидов
  • ЛИТЕРАТУРА
    ПРИЛОЖЕНИЯ
    Приложение 1 Нормативные значения и классификация показателей эякулята
  • А1.1 Нормативные значения
  • А1.2 Классификация
  • Приложение 2 Оборудование и безопасность
  • А2.1 Оснащение андрологической лаборатории
  • А2.2 Потенциальные риски в андрологической лаборатории
  • А2.3 Безопасность лабораторного персонала
  • А2.4 Безопасность лабораторного оборудования
  • А2.5 Безопасность и меры предосторожности при работе с жидким азотом
  • Приложение 3 Микроскопия
  • А3.1 Размещение образца
  • А3.2 Настройка окуляров
  • АЗ.З Фокусировка изображения
  • АЗ.4 Фокусировка окуляров
  • АЗ.5 Фокусировка светового конденсора
  • АЗ.6 Центрирование конденсора
  • АЗ.7 Регулировка фазовых колец
  • АЗ.8 Флуоресцентная микроскопия
  • Приложение 4 Приготовление основных растворов
  • А4.2 Фосфатно-солевой буфер Дульбекко (PBS)
  • А4.3 Среда Эрла
  • А4.4 Среда F-10 (Ham’s F-10 medium)
  • А4.5 Сбалансированный солевой раствор Хэнкса
  • А4.6 Трубная жидкость человека
  • * А4.7 Среда Кребса — Рингера
  • А4.8 Трибуферная соль (TBS)
  • А4.9 Раствор Тироде
  • А4.10 Окраска по Папаниколау
  • Приложение 5 Цервикальная слизь
  • А5.1 Введение
  • А5.2 Получение и консервация образцов цервикальной слизи
  • А5.3 Оценка цервикальной слизи
  • Приложение 6 Формы для записи результатов анализа эякулята и цервикальной слизи
  • А6.1 Образец формы для записи результатов семиологического анализа
  • А6.2 Образец формы для записи свойств цервикальной слизи
  • Приложение 7 Ошибки расчета и контроль качества
  • А7.1 Ошибки при расчете концентрации сперматозоидов
  • А7.2 Важность понимания ошибок подсчета
  • А7.3 Ошибки при измерении процентных значений
  • А7.4 Приготовление образцов эякулята для контроля качества
  • А7.5 Создание видеозаписи для контроля качества при анализе движности сперматозоидов
  • А7.6 Приготовление разбавленного эякулята для контроля качества при определении концентрации сперматозоидов
  • А7.7 Приготовление предметных стекол для внутреннего контроля качества при оценке морфологии сперматозоидов
  • А7.8 Калибровка оборудования
  • Приложение 8 Национальные программы внешнего контроля качества
  • семиологического анализа *
    РИСУНКИ
  • Рис. 2.1 Вариации общего числа сперматозоидов и их концентрации на протяжении 1,5-годового периода.
  • Рис. 2.2 Неспецифическая аггрегация сперматозоидов в эякуляте г 20
  • Рис. 2.3 Схематическое отображение различных типов агглютинации сперматозоидов
  • Рис. 2.4 Вспомогательные инструменты для оценки подвижности сперматозоидов
  • Рис. 2.5 Мазок, окрашенный эозин-нигрозином, в световом микроскопе
  • Рис. 2.6 Схематическое изображение типичных морфологических изменений
  • сперматозоида человека при гипоосмотическом стрессе
  • Рис. 2.7 Усовершенствованный гемоцитометр Нэйбауера
  • Рис. 2.8 Сперматозоиды для расчета в квадратах
  • Рис. 2.9 Изучение по всему покровному стеклу на присутствие подвижных
  • сперматозоидов
  • Рис. 2.10 Морфология «нормального» сперматозоида
  • Рис. 2.11 Методы приготовления мазков эякулята для оценки морфологии сперматозоидов
  • Рис. 2.12 Приготовление мазка эякулята с нормальной вязкостью
  • Рис. 2.13 Схематическое изображение некоторых патологических форм сперматозоидов человека
  • Рис. 2.14 Пероксидаза — положительные и — отрицательные клетки в сперме человека
  • Рис. 3.1 Лейкоциты в эякуляте
  • Рис. 3.2 Измеритель Кремера пенетрационных возможностей спермы
  • Рис. 3.3 Стандартные переменные, измеряемые с помощью системы CASA
  • Рис. 4.1 Хемилюминесценция, возникшая в ответ на обработку опсонизированным зимосаном
  • Рис. 4.2 Относительный вклад субпопуляций лейкоцитов и сперматозоидов в генерацию свободных радикалов в суспензии спермы
  • Рис. 4.3 Показаны сперматозоиды, окрашенные флуоресцентным агглютинином Pisum sativum (PSA)
  • Рис. 4.4 Фазово-контрастная микрофотография ооцита хомячка без зоны пеллюцида, содержащего сперматозоиды человека
  • Рис. 7.1 График Xbar для концентрации сперматозоидов
  • Рис. 7.2 График S для концентрации сперматозоидов
  • Рис. 7.3 График Блэнда-Альтмана для результатов оценок процента прогрессивно подвижных сперматозоидов, выполненных лаборантом и системой CASA
  • Рис. 7.4 График Юдена для оценки концентрации сперматозоидов
  • Рис. А2.1 Номограмма (расчетный график) для определения относительной центростремительной силы, исходя из радиуса ротора и скорости вращения
  • Рис. А5.1 Примеры феномена папоротника, образующегося в цервикальной слизи, нанесенной на предметное стекло и высушенного на воздухе
  • Рис. А7.1 Приемлемые различия между двумя повторными подсчетами как функция общего числа оцененных сперматозоидов
  • Рис. А7.2 Приемлемые различия между двумя повторными оценками как функция истинного процента и общего числа оцененных сперматозоидов
  • Рис. А7.3 Техника движения при оценке подвижности сперматозоидов
  • Рис. А7.4 Вид через окуляр с сеткой (красный квадрат)
  • Рис. А7.5 Вид микрометра предметного столика на мониторе и нарисованная сетка, см. текст для объяснения
  • БОКСЫ
  • Бокс 2.1 Подтверждение возможности сбора образца семени в контейнер
  • Бокс 2.2 Приготовление бромелайна
  • Бокс 2.3 Тщательное перемешивание эякулята
  • Бокс 2.4 Глубина влажного препарата
  • Бокс 2.5 Ошибки при оценке процентных значений
  • Бокс 2.6 Сравнение процентных значений, полученных при повторении расчетов
  • Бокс 2.7 Стандартная ошибка при оценке концентрации сперматозоидов 38 Бокс
  • 2.8 Достижение подсчета 200 сперматозоидов на повтор в центральных трех квадратах усовершенствованного гемоцитометра Нэйбауера 39 Бокс
  • 2.9 Объем спермы, наблюдаемый на поле зрения при микроскопии с высоким разрешением (МВР) при оценке влажного препарата глубиной 20 мкм
  • Бокс 2.10 Сравнение повторных подсчетов
  • Бокс 2.11 Достижение 200 сперматозоидов при расчете во всех девяти квадратах усовершенствованной камеры Нэйбауера
  • Бокс 2.12 Достижение подсчета 200 сперматозоидов на повтор в камере глубиной 100 мкм, одноразовой камере большого объема
  • Бокс 2.13 Расчет наблюдаемого объема поля зрения в камере глубиной 100 мкм
  • Бокс 2.14 Среда для заключения препаратов
  • Бокс 3.1 Приготовление смеси воск-вазелин
  • Бокс 3.2 Наблюдаемый объем на поле зрения при высоком увеличении на препарате цервикальной слизи глубиной 100 мкм
  • Бокс 4.2 Приготовление стеклянных пипеток
  • Бокс 6.1 Причины криоконсервации сперматозоидов
  • Бокс 6.2 Оценка риска криоконсервации и хранения спермы человека
  • Бокс 7.1 Некоторые термины программ обеспечения и контроля качества 190 Бокс
  • 7.2 Определение предупредительных и действительных границ для графика Xbar
  • Бокс 7.3 Альтернативный способ вычисления контрольных границ для Xbar с помощью совокупного стандартного отклонения
  • Бокс 7.4 Определение предупредительных и действительных контрольных границ для графика S
  • Бокс 7.5 Основные правила контроля для графиков КК
  • Бокс 7.6 Оценка систематических расхождений по результатам между лаборантами
  • Бокс 7.7 Основные особенности процедур внутреннего контроля качества
  • Бокс 7.8 Расписание процедур контроля качества
  • Бокс 7.9 Обзор методов контроля качества
  • Бокс А2.1 Вычисление силы центрифугирования
  • Бокс АЗ. 1 Объективы
  • Бокс А5.1 Определение объема цервикальной слизи
  • Бокс А5.2 Наблюдаемый объем при микроскопии с высоким разрешением на препарате глубиной 100 мкм
  • ТАБЛИЦЫ
  • Таблица 2.1 Приемлемые различия между двумя процентными значениями средних, определенных из двойного расчета 200 сперматозоидов (всего 400 подсчитанных сперматозоидов)
  • Таблица 2.2 Округленные значения стандартной ошибки (%) согласно общему числу подсчитанных сперматозоидов
  • Таблица 2.3 Требуемые разведения спермы, исходя из используемой камеры и оцениваемого поля зрения
  • Таблица 2.4 Приемлемые различия суммы, полученной двумя последовательными подсчетами
  • Таблица 2.5 Приемлемые различия между двумя расчетами полученной суммы: низкая концентрация сперматозоидов
  • Таблица 2.6 Сокращения, используемые в комментариях к вклейкам по морфологии 1-14
  • Таблица 2.7 Количество спермы, необходимое для проведения теста с иммунными шариками
  • Таблица 3.1 Подсчет индексов множественных дефектов сперматозоидов
  • Таблица 3.2 Индекс деформированности сперматозоидов (SDI),
  • рассчитанный у мужчин в фертильных и бесплодных парах
  • Таблица 3.3 Определение ранга плотности пенетрации сперматозоидов
  • Таблица 3.4 Классификация результатов теста с капиллярными трубочками
  • Таблица 7.1 Коэффициенты контрольных пределов для графиков Xbar и S на основе среднего стандартного отклонения (Sbar)
  • Таблица 7.2 Источники вариаций (ошибок) при оценке концентрации сперматозоидов и возможные решения
  • Таблица 7.3 Источники вариаций (ошибок) при оценке морфологии сперматозоидов и возможные решения
  • Таблица 7.4 Источники вариаций (ошибок) при оценке подвижности сперматозоидов и возможные решения
  • Таблица 7.5 Источники вариаций (ошибок) при оценке жизнеспособности сперматозоидов и возможные решения
  • Таблица А1.1 Минимальные референсные значения показателей эякулята (5-й процентиль и 95%-й доверительный интервал)
  • Таблица А1.2 Распределение значения показателей эякулята мужчин, чьи половые партнерши забеременели в течение 12 мес. после прекращения предохранения
  • Таблица А1.3 Классификация показателей эякулята
  • Таблица А7.1 Приемлемые различия между двумя повторными подсчетами, исходя из полученной суммы значений
  • Таблица А.7.2 Приемлемые различия между двумя процентными значениями, исходя из полученного среднего значения при повторных расчетах 100 сперматозоидов (суммарно 200 сперматозоидов) 278 Таблица А.7.3 Приемлемые различия между двумя процентными значениями, исходя из полученного среднего значения при повторных расчетах 200 сперматозоидов (суммарно 400 сперматозоидов)
  • Таблица А7.4 Приемлемые различия между двумя процентными значениями, исходя из полученного среднего значения при повторных расчетах 400 сперматозоидов (суммарно 800 сперматозоидов)
  • Дата выпуска

    2012

    Переплет

    КБС

    Страниц

    292

    Формат

    А4

    Язык

    русский